人抗磷脂酰乙醇胺抗體(APE)定性檢測(cè)試劑盒在國(guó)內(nèi)眾多實(shí)驗(yàn)室被廣泛使用，深受廣大科研者的好評(píng)。上海軒澤康生物專ye供應(yīng)酶聯(lián)免疫分析試劑盒，部分現(xiàn)貨供應(yīng)產(chǎn)品有人、大鼠、小鼠、兔、豬、犬、雞、猴、植物等ELISA試劑盒。所有elisa試劑盒均提供免費(fèi)代測(cè)，實(shí)驗(yàn)全程提供技術(shù)指導(dǎo)。歡迎咨詢、訂購(gòu)！

一.   檢測(cè)原理：試劑盒采用雙抗原一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被人APA抗原的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗原，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中人抗磷脂酰乙醇胺抗體（APE）的存在與否。

二. 試劑盒組成及其配置

三. 結(jié)果判斷

 1.  試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00；

                陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15。

2.  臨界值（Cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性

4.  陽(yáng)性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off），樣品為陽(yáng)性

四. 樣本處理及要求：人抗磷脂酰乙醇胺抗體(APE)定性檢測(cè)試劑盒

【血清樣本】：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或 4℃過夜，然后 1000×g 離心20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?span>-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

【血漿樣本】：用 EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的 30 分鐘內(nèi)于 2-8℃1000×g 離心15 分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?span>-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

【組織勻漿】：用預(yù)冷的 PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果），稱重后將組織jian碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9 的重量體積比，比如 1g 的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS 中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g 離心5~10分鐘，取上清檢測(cè)。

【細(xì)胞培養(yǎng)物上清】：請(qǐng) 1000×g 離心20 分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?span>-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

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