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微量法:超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測盒

簡要描述:微量法:超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測盒中SOD(EC 1.15.1.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,催化超氧化物陰離子發生岐化作用,生成 H2O2 和 O2。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是 H2O2 主要生成酶,在生物抗氧化系統中具有重要作用。

  • 更新日期:2025-05-20
  • 訪  問  量:108

產品介紹

品牌軒澤康規格50管/48樣
供貨周期現貨主要用途檢測酶活性
應用領域醫療衛生,化工,生物產業,農林牧漁,制藥/生物制藥

注意:正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。

貨號:XZK-W-A500

規格:100T/96S

微量法:超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測盒產品內容:

試劑一:液體 20mL×1 瓶,4℃避光保存;

試劑二:粉劑 ×1 支,4℃避光保存;臨用前使用20ml試劑一充分溶解,配好的試劑 4℃避光可保存一周。

試劑三:液體 110μL×1 支,4℃保存;臨用前將試劑三用蒸餾水稀釋 10 倍,用多少配多少。

試劑四:液體 2.5mL×1 瓶,-20℃保存。

試驗中所需的儀器和試劑:

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾

產品說明:SOD(EC 1.15.1.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,催化超氧化物陰離子發生岐化作用,生成 H2O2 和 O2。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是 H2O2 主要生成酶,在生物抗氧化系統中具有重要作用。

微量法:超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測盒 操作步驟:

一、樣品的前處理:

(1)    細菌、細胞或組織樣品的制備:

先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清,按照每 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液(生理鹽水或者PBS),超聲波破碎(功率 20%或 200w,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次)。8000g 4℃離心 10 分鐘,取上清, 置冰上待測。

稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液(生理鹽水或者PBS)進行冰浴勻漿; 8000g 4℃離心 10 分鐘,取上清,置冰上待測。

(2)    血清(漿)樣品:直接檢測

二、測定操作表:

1.   分光光度計/酶標儀預熱 30min 以上,調節波長至 450nm,蒸餾水調零。

2.   測定前將試劑一、二和四 37℃水浴 5min 以上。

3.   樣本測定(按順序加入下列試劑)

試劑名稱(μL)

測定管

對照管 1

對照管 2

對照管 3

樣本

10




蒸餾水


10

10

10

試劑三(稀釋后)

10

10

10

10

試劑四

20

20

20

20

試劑二

160

160

160

160

 

充分混勻,室溫靜置 30min 后,450nm 處測定各管吸光值 A。

注意事項:

1、試劑三為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。

2、對照管只需要做三管,求平均值。

3、SOD 為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?對照管的范圍是 0.4-1。對照管吸光值過低可能是:

(1)試劑三活性低,可以適當減少稀釋倍數;

(2)沒有按順序加試劑;

(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間可以延長到 40min)。

(4)對照管吸光值過高可能是試劑三未按操作說明書稀釋相應倍數。

(5)可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般,將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10 倍后再測,通常可以使測定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數。

SOD 活性計算:

1、抑制百分率的計算

抑制百分率=(A 對照管-A 測定管) ÷A 對照管× 100%

盡量使樣本的抑制百分率在 10-90%范圍內。如果計算出來的抑制百分率小于 10%或大于90%,則通常需要調整加樣量后重新測定。如果測定出來的抑制百分率偏高,則需將樣本用提取液適當稀釋;如果測定出來的抑制百分率偏低,則需重新準備濃度比較高的待測樣本。

2、SOD 酶活性單位:在上述黃嘌氧化酶藕聯反應體系中抑制百分率為 50%時,反應體系中的 SOD 酶活力定義為一個酶活力單位(U/mL)。

3、SOD 酶活性計算:

血清(漿)SOD 活性(U/mL)=[抑制百分率÷(1 -抑制百分率)×V 反總]÷V 樣

=20×抑制百分率÷(1 -抑制百分率)

組織、細菌或培養細胞 SOD 活力計算:

按樣本蛋白濃度計算

SOD 活性(U/mg prot)=[抑制百分率÷(1 -抑制百分率)×V 反總]÷(V 樣×Cpr )

=20×抑制百分率÷(1 -抑制百分率)÷Cpr

需要另外測定,建議使用上海優選生物科技有限公司 BCA 蛋白質含量測定試劑盒。

按樣本鮮重計算

SOD 活性(U/g 鮮重)=[抑制百分率÷(1 -抑制百分率)×V 反總]÷(W ×V 樣÷V 樣總)

=20×抑制百分率÷(1 -抑制百分率)÷W

c.按細菌或細胞個數計算

SOD 活力(U/104 cell)=[抑制百分率÷(1 -抑制百分率) ×V 反總]÷(500×V 樣÷V 樣總)

=0.04×抑制百分率÷(1 -抑制百分率)

V 反總:反應體系總體積,0.2mL;

V 樣:加入反應體系中樣本體積,0.01mL;

V 樣總: 加入提取液體積,1 mL;

Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL ;

W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500 萬。


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